細胞馴化

1）直接馴化

大部分情況下，培養(yǎng)于其他培養(yǎng)基中的細胞，可以直接適應(yīng)Balance CD 293 medium，只要按照日常傳代方式（稀釋）更換培養(yǎng)基即可。

2）漸進式馴化

注意：選用低代次、處于對數(shù)生長期的細胞進行馴化

①在原培養(yǎng)基中復(fù)蘇細胞并繼續(xù)使用該培養(yǎng)基傳代2到3次至細胞生長穩(wěn)定，當(dāng)細胞密度達到2x10 6 cells/ml后進行傳代，傳代細胞密度控制在0.5-0.6×10 6 cells/mL，5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293培養(yǎng)基的比例為75:25；

②將細胞置于37℃，5% CO2，轉(zhuǎn)速為110-175 rpm的恒溫搖床中進行培養(yǎng)；

③當(dāng)細胞密度3-4天后達到3x10 6 cells/ml且細胞活率>90%，傳代時5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293培養(yǎng)基的比例為50:50，細胞密度控制在0.5×10 6 cells/mL。如細胞生長慢，可離心上清，留20%條件培養(yǎng)基，加入80%的5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293 培養(yǎng)基比例為75:25的混合培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)；

④重復(fù)步驟③逐步增加Balance CD 293培養(yǎng)基所占的比例(5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293 培養(yǎng)基的比例為25:75至10:90）直到100%的Balance CD 293培養(yǎng)基；

⑤經(jīng)過在100%的 Balance CD 293 培養(yǎng)基中的幾次傳代培養(yǎng)，傳代后3-4天細胞的密度可以達到2-3×10 6 cells/mL，細胞活率大于90%，這說明細胞已經(jīng)適應(yīng)了Balance CD 293 培養(yǎng)基。之后進行細胞的傳代培養(yǎng)時，細胞的起始密度可以降到0.3×10 6 cells/mL，一般傳代2-3次后再進行轉(zhuǎn)染實驗。

注意: 一般細胞馴化過程中，前三代細胞的狀態(tài)可能不是很好，但一般從第四代開始狀態(tài)會有改善。

細胞傳代

1）取細胞培養(yǎng)樣品，人工或儀器測定細胞密度以及活率；

2）計算傳代所需的細胞用量，建議起始細胞密度為0.2-0.4×10 6 cells/mL。建議復(fù)蘇的細胞至少培養(yǎng)兩代后再用于其他用途。傳代培養(yǎng)體積建議為15-20 mL（100 mL的培養(yǎng)瓶）或50-60 mL（250 mL 的培養(yǎng)瓶）；

3）將細胞置于37℃，5%CO2，轉(zhuǎn)速為110-175 rpm的恒溫搖床中進行培養(yǎng)，3-4天傳代一次。

細胞轉(zhuǎn)染在Balance CD 293培養(yǎng)基中，采用商業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑（例如 Gibco 293Fectin™ExpiFectamine™ 293 Transfection Kit ）或 PEI 可以實現(xiàn)對 HEK293 細胞的高效轉(zhuǎn)染。