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即用型培養(yǎng)基CW003培養(yǎng)基昆蟲細(xì)胞的細(xì)胞馴化方法
更新時(shí)間:2022-12-08   點(diǎn)擊次數(shù):511次

產(chǎn)品描述


CW003培養(yǎng)基適用于sf9、High Five等昆蟲細(xì)胞懸浮培養(yǎng)和瞬時(shí)表達(dá),含有細(xì)胞生長的全

部營養(yǎng)成分,無需添加物即可使用。

產(chǎn)品特點(diǎn)

? 產(chǎn)品不含血清

? 即用型培養(yǎng)基,無需添加額外成分

? 支持sf9、High Five等昆蟲細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)馴化與高密度培養(yǎng)

? 支持桿狀病毒載體表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)重組基因蛋白

基礎(chǔ)參數(shù)

產(chǎn)品使用方法

細(xì)胞馴化與傳代

1) 培養(yǎng)條件

溫度:27oC;推薦搖床轉(zhuǎn)速:110-130 rpm;傳代細(xì)胞密度控制在0.8-1.2×106 cells/mL。

2) 直接馴化

大部分情況下,培養(yǎng)于其他培養(yǎng)基中的sf9、High Five細(xì)胞,可以直接適應(yīng)至CW003培養(yǎng)

基,只要按照日常傳代方式(稀釋)更換培養(yǎng)基即可。

3) 漸進(jìn)式馴化

注意:選用低代次、處于對數(shù)的細(xì)胞進(jìn)行馴化。

①在原培養(yǎng)基中復(fù)蘇細(xì)胞并繼續(xù)使用該培養(yǎng)基傳代2到3次至細(xì)胞生長穩(wěn)定,使用原培養(yǎng)基

+CW003培養(yǎng)基(CW003比例從25%至90%)逐漸馴化,傳代細(xì)胞密度控制在0.8-1.1×106

cells/mL,每48h進(jìn)行傳代。

②待細(xì)胞在含90%以上CW003培養(yǎng)基生長正常后,可嘗試將細(xì)胞傳代至100% CW003培養(yǎng)基

中,并連續(xù)傳代3-4次,如細(xì)胞保持穩(wěn)定生長,即已適應(yīng)至CW003培養(yǎng)基。

細(xì)胞復(fù)蘇

1) 迅速取出凍存的細(xì)胞,在37℃水浴條件下進(jìn)行快速解凍(可以在水中輕輕晃動,時(shí)間控制

在120s以內(nèi)),至凍存管內(nèi)剩余小塊冰晶。

2) 在生物安全柜中,將融化的細(xì)胞全部轉(zhuǎn)移至無菌離心管中,加入10 mL預(yù)熱至37℃的培養(yǎng)

基,離心換液(175 g,5 min)去除全部上清,加入20-30mL預(yù)熱至37℃新鮮培養(yǎng)基重懸,后

轉(zhuǎn)移至搖瓶培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存

1) 凍存細(xì)胞時(shí),要選擇處于對數(shù)、狀態(tài)良好,活力≥98%的的細(xì)胞;

2) 事先計(jì)算好凍存的細(xì)胞管數(shù)和所用的培養(yǎng)基的體積,凍存密度為2.5-3.5×107 (通常凍存

濃度為1.0-2.0×107)cells/ml/支;

3) 細(xì)胞凍存液配制:

45%新鮮培養(yǎng)基+45%原培養(yǎng)基(上清)+10%DMSO,充分混勻,存放于4℃,一般為當(dāng)

天用當(dāng)天制備;

4) 以175 g,5 min的條件離心收集細(xì)胞,棄上清,用凍存培養(yǎng)基(

4℃ )重懸細(xì)胞;

5) 將重懸的細(xì)胞液迅速分裝細(xì)胞到無菌的凍存管中,每支1ml,并貼好標(biāo)簽;

6) 將細(xì)胞凍存管放到程序降溫凍存盒(注意填充異丙醇,4℃預(yù)冷)中,置于-80℃ 冰箱(每

分鐘下降1℃),過夜存放后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中進(jìn)行保存。



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