細(xì)胞和組織PCR 試劑盒Plus(免核酸提?。?/p>
貨號(hào):Nu-C01
試劑盒應(yīng)用
本試劑盒可用于動(dòng)物組織或細(xì)胞DNA 的克隆、重組細(xì)胞株鑒定、DNA 病毒鑒定、STR 鑒定等。TC-DNA-Lysis 采用配方,10 分鐘內(nèi)裂解各種細(xì)胞和組織。使用過程中無需大體積樣本、無需反復(fù)離心,從而獲得高質(zhì)量的DNA 模板。經(jīng)過驗(yàn)證,該試劑盒可以對單個(gè)細(xì)胞或10 個(gè)病毒粒子進(jìn)行檢測。
本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等域。
試劑盒組成
保存條件
-20oC 保存。
使用將TC-DNA-Lysis 室溫充分混勻,使用可4℃保存。
2×TaqMix(With Dye)溶解后需置于冰上,避免反復(fù)凍融。
需要準(zhǔn)備
金屬恒溫浴、離心機(jī)、PCR 儀
使用方法
一、不同樣品的處理方法
1. 組織液的處理
(1)組織液包括組織研磨液、細(xì)胞懸液等。取10 μL組織液置于離心管中。
(2)加入20 μLTC-DNA-Lysis。
(3)充分混勻。
(4)置于55℃作用5 分鐘,然后95℃作用5min。溶液即為DNA 模板。
2. 組織塊的處理
(1)用眼科剪剪取1-2mm 的組織塊,并將組織塊剪成肉泥狀。
(2)加入20 μL TC-DNA-Lysis。
(3)充分混勻。
(4)置于55℃作用5 分鐘,然后95℃作用5min。
(5)10,000 轉(zhuǎn)離心60 取上清。上清即為DNA 模板。
3. 在DNase free 的離心管中配制PCR 反應(yīng)體系
4. 按照以下方法設(shè)定PCR 反應(yīng)
注意事項(xiàng)
一、試劑盒使用注意事項(xiàng)
(1)所有試劑應(yīng)按照適合溫度儲(chǔ)存。請勿反復(fù)凍融。
(2)使用后均需要對操作區(qū)進(jìn)行消毒,消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材均需使用商品化的無酶耗材。
(3)TC-DNA-Lysis 采用配方,若出現(xiàn)肉眼可見小球狀物質(zhì)屬于正?,F(xiàn)象。
(4)TC-DNA-Lysis 頻繁使用,可在4℃保存。不使用可放-20℃保存。
二、樣本注意事項(xiàng)
(1)細(xì)胞在含/不含血清的環(huán)境中均可直接使用試劑盒。
(2)擴(kuò)增2kb 以內(nèi)片段,細(xì)胞樣品濃度不超過1000 個(gè)細(xì)胞。如若擴(kuò)增片段超過2kb,可適當(dāng)提高細(xì)胞濃度。
(3)不同組織使用不同的眼科剪和眼科鑷進(jìn)行處理,防止交叉污染導(dǎo)致檢測結(jié)果偏差。
三、試劑盒使用過程中注意事項(xiàng)
(1)PCR 過程中推薦使用陰性對照和陽性對照。
(2)整個(gè)過程中使用的吸頭、離心管等耗材應(yīng)丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中,防止形成環(huán)境污染。
(3)2×Master TaqMix(With Dye)已包含染料,可在反應(yīng)結(jié)束后直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。
(4)PCR 產(chǎn)物3’末端含有A,可直接進(jìn)行TA 克隆。
四、試劑盒使用后注意事項(xiàng)
(1)TC-DNA-Lysis 處理后的DNA 模板可在-20℃保存至少1 個(gè)月。避免反復(fù)凍融,防止基因組斷裂。
(2)PCR 反應(yīng)完成后,嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)區(qū)開蓋。應(yīng)在污染區(qū)進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,防止氣溶膠污染。
(3)為防止試劑盒污染,請勿將不同批號(hào)試劑盒混用。
檢測實(shí)例
常見問題解析
15021202164
上海市楊浦區(qū)國康路100號(hào)2層
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