真假胎牛血清及擇取胎牛血清質(zhì)量區(qū)別
近日，實驗室的細胞培養(yǎng)人員抱怨培養(yǎng)瓶中在顯微鏡的觀察下有若干“小蠕蟲”爬動，創(chuàng)凌生物提示您，這是黑膠蟲，可以說，這樣的細胞培養(yǎng)瓶可以說廢棄了，連二次實驗的價值都沒，話說黑膠蟲難道是實驗室的操作不當(dāng)，如添加細胞因子，小分子化合物等中出現(xiàn)了人為的環(huán)境污染？不是的，黑膠蟲產(chǎn)生的致命原因是假的胎牛血清導(dǎo)致！
據(jù)病毒所和軍科院鑒定是一種寄生于牛血清內(nèi)的一種原蟲，似乎和草履蟲和變形蟲有類似之處，然而由于課題經(jīng)費不夠而不能繼續(xù)進行下去。
在細胞培養(yǎng)的時候，有時會在400倍顯微鏡下看到小黑點在動，小黑點有時呈點狀，有時呈小的片狀，運動形式為在原地振動（類似布朗運動），這種小黑點既不是細菌、霉菌，也不是支原體（我們曾經(jīng)請周守長用血平板培養(yǎng)過，沒有菌落出現(xiàn)），目前業(yè)內(nèi)人士稱其為“黑膠蟲”。
國內(nèi)的血清中，通常滅活之后都會有絮狀沉淀出現(xiàn)，而黑膠蟲出現(xiàn)時，所使用的血清被反復(fù)凍融過多次。所以推測，所謂的“黑膠蟲”其實就是血清中的某些蛋白成分的物質(zhì)，經(jīng)過滅活之后喪失活性，在培養(yǎng)基中，鏡檢見到的運動其實是這些物質(zhì)在溶液中做“布朗運動”。隨著細胞消耗培養(yǎng)基，這些物質(zhì)越來越多，*后細胞所用的營養(yǎng)消耗完，細胞容易死亡。
市場上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，很多科研工作者，特別是剛接觸細胞培養(yǎng)的人，難以分辨血清質(zhì)量的優(yōu)劣，假的胎牛血清，導(dǎo)致黑膠蟲的現(xiàn)象越明顯，總結(jié)如下：
一、外觀
拿到血清，*先接觸的是血清外觀，對于缺少細胞培養(yǎng)經(jīng)驗的人來說，外觀的判斷尤為重要
1、顏色
根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國的細胞培養(yǎng)用血清標準是不高于20mg/dl，實際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，這個指標的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴謹規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。
國產(chǎn)血清的采血點很分散，大多是由屠戶采血后馬上離心收集，所以很少會有溶血，表現(xiàn)出明亮的蠟黃色，當(dāng)然，國產(chǎn)血清也很少有標準意義上的胎牛血清。
進口胎牛血清或多或少總有點溶血，因為真正的胎牛血清凝血功能差，紅細胞容易破裂。
總的來說，國產(chǎn)的血清呈現(xiàn)出蠟黃。進口的血清，質(zhì)量的呈現(xiàn)出談黃、微紅色，如Gibco 16000，差點的呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。當(dāng)然，熱滅活血清或保存不當(dāng)?shù)难?，由于血紅蛋白的破壞氧化，會呈現(xiàn)出暗紅，甚至咖啡色。
2、沉淀
很多血清客戶，會發(fā)現(xiàn)進口血清有沉淀，從而懷疑血清的質(zhì)量問題，這是沒有根據(jù)的。
血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生，對血清質(zhì)量沒有任何影響，沉淀的產(chǎn)生原因很多，和廠家的加工生產(chǎn)方式密切相關(guān)。
國產(chǎn)的血清，大多來自北方，由于價格低廉，保存環(huán)境都不好，從采血、冷凍、運輸?shù)缴a(chǎn)會經(jīng)過多次凍融，每次凍融過程，就會析出部分纖維蛋白沉淀，這樣，血清成品過濾后看起來反而更加的“干凈”，很少有沉淀產(chǎn)生。
進口的胎牛血清，過濾分裝前很少會反復(fù)凍融，生產(chǎn)后的成品也是清澈的，但隨著時間的推移，血清中的大量纖維蛋白會析出形成沉淀。當(dāng)然，進口的新生牛血清，一般牛齡都在2周左右，血清中的各種蛋白含量明顯偏高，生產(chǎn)后血清可能會渾濁，甚至有大量沉淀。
當(dāng)然，購買回來的血清都是冰凍狀態(tài)，使用時需要融化，融化過程在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進行，否則沉淀相對較多，雖然沉淀并不直接影響血清的質(zhì)量，但對細胞的顯微觀察有一定的阻礙。
3、澄清度
進口胎牛血清由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低，表現(xiàn)為稀薄、清淡，而國產(chǎn)血清，因為絕大多數(shù)是新生牛血清，相對而言更加粘稠，顏色略深，這對于初步接觸血清的人很難判斷，但把兩者進行對比，可容易分辨。
二、主要技術(shù)指標
目前國內(nèi)血清的質(zhì)量標準是2005版的《中華人民共和國藥典》，主要指標有以下幾點：
1、內(nèi)毒素
標準為不高于5EU/ml。內(nèi)毒素是細菌破碎后細胞壁的成分，因此內(nèi)毒素含量的高低可表現(xiàn)出采血到生產(chǎn)一系列過程中的無菌操作情況。目前，國產(chǎn)血清基本都能達到這一要求，很多進口胎牛血清內(nèi)毒素含量反而更高，如Gibco 26140，只要求不高于50EU/ml，高出我國標準10倍，即使是16000，也要10EU/ml，血清質(zhì)量也未見影響?？梢姡瑑?nèi)毒素含量偏高不影響質(zhì)量，除非含量*，預(yù)示著已經(jīng)污染。
2、總蛋白含量
胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數(shù)值偏高，說明采血的牛齡偏大，不是胎牛，數(shù)值偏低，表明血清可能摻水了。
3、血紅蛋白
標準為不高于20mg/dl，顏色越紅，數(shù)值越高，反之，數(shù)值越低。
4、pH
國產(chǎn)血清，大多高于7.5，進口胎牛血清，大多低于7.5，具體原因未知，可能和牛齡有關(guān)，這也能用來初步鑒別血清的來源。
5、微生物
包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等。隨著國內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高，細菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制，支原體經(jīng)過0.1um過濾，大多也能清除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴重的，主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入，又無法過濾，很難*清除，但對血清質(zhì)量影響不大。病原性病毒，特別是BVDV，在國產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在，這類微生物是影響國產(chǎn)血清質(zhì)量的重要因素，而進口胎牛血清中基本都控制的很好。
6、免疫球蛋白
國產(chǎn)血清的只是定性檢測，結(jié)果也很不準確，進口胎牛血清大多定量檢測。免疫球蛋白的數(shù)值能*體現(xiàn)出采血的時的牛齡情況，國產(chǎn)血清，基本都是新生牛的，血清中容易產(chǎn)生IgM，IgG的含量也偏高，進口胎牛血清，不含IgM，IgG的含量也較低。
7、其它
不管是國產(chǎn)還是進口血清，都是不測抗生素的（無四環(huán)素胎牛血清除外）。國外，抗生素的使用很嚴格，用量也很少，每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以溯源的，因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量極低；國內(nèi)，抗生素的濫用已成了普遍現(xiàn)象，血清中殘留很高，對細胞培養(yǎng)極為不利，這是國產(chǎn)血清質(zhì)量差的根本原因。
三、血源
市場上的血清血源主要分為中國、北美、南美和澳洲。
1、國產(chǎn)血清質(zhì)量差，這是*的，主要原因并不是生產(chǎn)廠家的責(zé)任，而是天然環(huán)境差和抗生素的大量使用。國內(nèi)環(huán)境污染嚴重，同時飼養(yǎng)過程中抗生素極其濫用，有毒有害物質(zhì)會大量殘留在血清中，*終不利于細胞的生長。
2、南美血清，來源很多，如Bioind的以色列巴拿馬(04-001-1A/B，04-121-1A/B，04-001AUS-1A/B，04-002-1A/B，04-222-1A/B，04-011-1A/B，04-201-1A/B，04-400-1A/B) 、Gibco的烏拉圭、巴西等，這些血清由于采血的不可控性，質(zhì)量參差不齊，當(dāng)然，相對于國內(nèi)血清來說好的多。另外，國內(nèi)銷售的南美血清大多顏色鮮紅，如Bioind、Gibco、Hylone等品牌，但阿根廷的血清例外，這可能和各國的采血、生產(chǎn)工藝有關(guān)。
3、北美血清，主要來自美國和加拿大，如Hclone的SH30396、SH30070、SH30071、Gibco的16000-044、26140-079等。這類血清，等級越高的顏色越淡，表現(xiàn)為淡黃中帶一點微紅，SH30070和SH30396對比就很明顯，特級胎牛血清基本就能進行干細胞培養(yǎng)。北美血清還有一個顯著特點就是每瓶血清都能溯源，這對一些大型的疫苗廠、藥廠尤為重要。
4、澳洲血清，來源主要是新西蘭和澳大利亞，這是在北美血清禁運之后進入中國市場的，一般不具有溯源功能，由于生產(chǎn)、運輸?shù)仍颍瑑r格相對來說比較貴。拿Gibco的10099和16000相比較，后者質(zhì)量等級更高，顏色更淡，性價比更高。
